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Vésicules biomimétiques à base de PIP2 pour étudier des interactions protéines membranes : application à une protéine de la famille des ERM (ezrine, radixine, moésine).

par Webmaster - 17 octobre 2007

Orateur :

Catherine Picart, Dynamique des Interactions Membranaires Normales et Pathologiques, Université de Montpellier 2

Salle :

C023 (RDC LR6 côté CECAM)

Sujet :

L’interface entre la membrane plasmique et le cytosquelette est une structure dynamique qui participe à de multiples évènements cellulaires dont la morphogenèse, la motilité, et le bourgeonnement cellulaire. Etudier les interactions entre des protéines et la membrane plasmique dans des systèmes reconstitués in vitro permet de simplifier le nombre de paramètres et de pouvoir les faire varier systématiquement. De plus, utiliser des vésicules de tailles différentes permet d’obtenir des informations complémentaires. Ainsi, des petites vésicules (taille 100 nm) sont utilisées pour déterminer des constantes d’interaction alors que des vésicules géantes (taille 5-35 µm) sont utilisées pour réaliser des observations microscopiques.

Nous avons mis au point la préparation de vésicules unilamellaires de taille calibrée (LUVs, taille 100 nm) contenant du PIP2 en proportions variables et avons réussi à fabriquer des vésicules géantes (GUVs) contenant du PIP2. Notre système d’étude est celui des ERM, protéines établissant un lien direct entre le cytosquelette d’actine et la membrane plasmique via deux domaines de liaisons, l’un à l’actine, et l’autre à la membrane via le PIP2. En conformation fermée, les ERM sont inactives et elles deviennent actives lorsqu’elles sont en interaction avec le PIP2, qui permet leur ouverture. Avec les LUVs, nous avons pu déterminer la constante d’interaction de l’ezrine (rendue fluorescente) pour la membrane contenant du PIP2 à l’aide d’expériences de co-sédimentation et de spectroscopie de fluorescence corrélée. Nous avons aussi montré que l’interaction entre l’ezrine et le PIP2 suit une stoechiométrie 1 :1 et que le PIP2 n’est pas en clusters lors de l’interaction. De plus, la large taille du domaine FERM peut conduire à masquer des molécules de PIP2 quand la concentration en PIP2 dans la membrane est importante.

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