Préparation de l'ADN
L'ADN est extrait à chaud à partir de cellules épithéliales
de la bouches récoltées par rinçage :
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Se rincer la bouche avec un verre d'eau et rejeter cette eau
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Se rincer à nouveau vigoureusement la bouche avec 10 mL de PBS stérile
et recueillir le prélèvement dans un tube à centrifuger
de 15 mL
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Centrifuger à 4500 rpm pour obtenir un culot visible de cellules.
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Eliminer le surnageant
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Laver le culot avec 2 mL de PBS et centrifuger.
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Eliminer le surnageant.
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Remettre les cellules en suspension dans 100 mL de PBS et transvaser cette
suspension dans un tube Eppendorf.
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Placer le tube 5 min. à 100 °C de façon à lyser
les cellules, dénaturer les protéines et libérer l'ADN.
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Centrifuger 2 min. à 13 000 rpm, récupérer le surnageant
dans un tube.
Conserver dans la glace jusqu'à utilisation ou stocker au congélateur
(- 20°C)
La plupart des études n'ont révélé aucune association
entre le polymorphisme de restriction EcoR I et les concentrations sanguines
de cholestérol et de triglycérides.
A notre connaissance, il n'y a pas à ce jour, de corrélation
entre le polymorphisme observé et une maladie génétique
connue.
Même si cela enlève quelque «piquant» à la
séance de travaux pratiques, nous pensons qu'il est préférable
d'anonymer les prélèvements d'ADN.
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