Les travaux de cette thèse se sont portés sur la synthèse et l’évaluation biologique de sondes moléculaires à rétention de
signal fluorescent répondant à une activité enzymatique. Les sondes, initialement éteintes (OFF), sont constituées de trois
composantes : un substrat reconnu spécifiquement par l’enzyme cible, un espaceur auto-effondrable, garant de la stabilité
de l’édifice global vis-à-vis de l’hydrolyse spontanée en milieu physiologique, et enfin, un fluorophore hautement
hydrophobe, capable d’émettre une forte fluorescence à l’état solide une fois relargué. De telles molécules organiques
donnent de nombreux avantages vis-à-vis de sondes concurrentes : une sensibilité de détection accrue puisqu’elles profitent
du phénomène d’amplification enzymatique du signal, un fort rapport signal sur bruit grâce à son caractère furtive
(éteint/allumé), et enfin une excellente rétention du signal au siège de l’activité enzymatique cible, grâce au caractère
précipitant du fluorophore libéré.
Toutefois, une des principales limites de cette technologie est la longueur d’onde d’émission du fluorophore utilisé
jusqu’alors. L’ELF-97, malgré ses propriétés spectroscopiques très intéressantes à l’état solide (φ = 50 % et une forte
résistance au photoblanchiment) s’excite dans l’UV (365 nm) et émet dans le vert (520 nm), des longueurs d’ondes favorisant
les phénomènes de diffusion, d’absorption et d’auto-fluorescence de l’échantillon biologique. Par conséquent, cela limite les
applications de telles sondes à des expériences in vitro ou in cellulo, mais ne sont pas réalisables in vivo, à cause d’une trop
faible pénétration des photons dans les tissus biologiques (∼ 1 mm).
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