LA PCR quantitative

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Informations générales sur la formation LA PCR quantitative

Content Presentation

Présenter tous les paramètres des cinétiques d’amplification et de dissociation et souligner leur importance dans les calculs de quantification
Souligner l’impact du choix des amorces sur les résultats
Rendre le design des amorces accessible
Trouver une bonne stratégie pour gagner en temps et en efficacité
Comprendre l’importance de la rigueur extrême nécessaire dans cette technique à chaque étape afin d’obtenir reproductibilité et fiabilité des résultat

Ingénieur INSERM

Content Programme

Précautions et risques biologiques
Mise en place d’un projet de quantification : les points à considérer
Les équipements : thermocycleurs, circuit PCR, Nanodrop, bio analyseur
Les consommables
Les kits
Protocoles et optimisation
Échantillons, ARN, cDNA, ADN : nature, qualité, extraction, quantification, conservation
La reverse transcription : une étape clé à optimiser en permanence
Le cDNA
Détecter les inhibitions de la PCR
Les amorces
La gamme d’étalonnage
Les contaminations et cross contaminations

Présentation des équipements nécessaires leur bonne utilisation
Circuit PCR, Nanodrop, Instrument de QPCR et éventuellement Robot pipetteur
Les bons gestes et les pièges à éviter
Se focaliser sur la programmation, l’analyse d’une manipulation et l’exploitation des résultats
Présentation du logiciel du StepOne Plus
Préparation et programmation de la manipulation et des runs
Réalisation de deux gammes d’étalonnage – Une série d’échantillons
Analyse des runs
Calcul et exploitation dans Excel
Présentation d’outils gratuits pour les calculs ou la normalisation : REST, Bestkeeper, Genorm
Bibliographie