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LA PCR quantitative

Type Formation qualifiante
Discipline(s) Biologie Chimie
Ouvert à

Personnels scientifiques et techniques

Tarif

1 920 euros

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Zoom sur

Objectifs de la formation

  • Présenter tous les paramètres des cinétiques d’amplification et de dissociation et souligner leur importance dans les calculs de quantification
  • Souligner l’impact du choix des amorces sur les résultats
  • Rendre le design des amorces accessible
  • Trouver une bonne stratégie pour gagner en temps et en efficacité
  • Comprendre l’importance de la rigueur extrême nécessaire dans cette technique à chaque étape afin d’obtenir reproductibilité et fiabilité des résultat

Intervenant

Ingénieur INSERM

Programme

Déroulement de la formation

  • 3 jours (21 heures)

Contenu de la formation

Aspect Théorique 

  • Mesure du signal d’amplification par fluorescence  
  • Analyse de la courbe de dissociation (Melting Curve Analysis)
  • Étude de la cinétique d’amplification
  • Efficacité de la PCR 
  • Quantification par PCR en temps réel 
  • Stratégie de normalisation
  • Les résultats
  • Publication et PCRQ : les MIQUE
  • Validation des microarray et PCRQ haut débit
  • Différentes approches du génotypage ou polymorphisme en PCRQ  
  • Dessin des amorces de PCRQ  
  • Stratégie efficace de design 

Aspect pratique

  • Précautions et risques biologiques
  • Mise en place d’un projet de quantification : les points à considérer
  • Les équipements : thermocycleurs, circuit PCR, Nanodrop, bio analyseur
  • Les consommables
  • Les kits  
  • Protocoles et optimisation  
  • Échantillons, ARN, cDNA, ADN : nature, qualité, extraction, quantification, conservation
  • La reverse transcription : une étape clé à optimiser en permanence  
  • Le cDNA
  • Détecter les inhibitions de la PCR  
  • Les amorces
  • La gamme d’étalonnage
  • Les contaminations et cross contaminations

Partie pratique

  • Présentation des équipements nécessaires leur bonne utilisation
  • Circuit PCR, Nanodrop, Instrument de QPCR et éventuellement Robot pipetteur  
  • Les bons gestes et les pièges à éviter  
  • Se focaliser sur la programmation, l’analyse d’une manipulation et l’exploitation des résultats
  • Présentation du logiciel du StepOne Plus
  • Préparation et programmation de la manipulation et des runs  
  • Réalisation de deux gammes d’étalonnage – Une série d’échantillons
  • Analyse des runs
  • Calcul et exploitation dans Excel  
  • Présentation d’outils gratuits pour les calculs ou la normalisation : REST, Bestkeeper, Genorm
  • Bibliographie 
Mots clés